Anti-bfgf humanized double-stranded antibody with stable disulfide bond, preparation method and application thereof

Anticorps double brin humanisé anti-bfgf avec liaison disulfure stable, procédé de préparation et applications associés

二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用

Abstract

La présente invention concerne un anticorps double brin humanisé anti-bFGF avec une liaison disulfure stable, son procédé de préparation et ses applications. La séquence d'acides amines de l'anticorps double brin humanisé anti-bFGF est montrée dans la SEQ ID n° 1. La séquence nucléotidique du gène codant pour l'anticorps double brin humanisé anti-bFGF est montrée dans la SEQ ID n° 2. Par mutation dirigée vers un site, un résidu cystéine est introduit dans chaque anticorps simple brin, puis est introduit la liaison disulfure et un « ds-Diabody » est formé. Des expériences montrent que le « ds-Diabody » obtenu présente les avantages suivants : stabilité améliorée, meilleure affinité de liaison à l'antigène spécifique bFGF, poids moléculaire relatif modéré, bon ciblage de la tumeur, pouvoir de pénétration du tissu tumoral amélioré et une élimination du sang plus rapide, ce qui promet un large champ d'applications dans le diagnostic clinique et le traitement médical.
本发明公开了一种二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用。该二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该抗bFGF人源双链抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明是在单链抗体的基础上,通过定点突变引入2个半胱氨酸从而引入二硫键,构建成ds-Diabody。通过实验证明,得到的ds-Diabody具有如下优点:稳定性增强;其与抗原bFGF特异性结合,亲和力更好;相对分子质量适中,具有良好的肿瘤靶向、瘤组织穿透力和较长的血液清除率,在临床诊断和治疗方面具有广阔的应用前景。
Disclosed are an anti-bFGF humanized double-stranded antibody with stable disulfide bond, preparation method and applications thereof. The amino acid sequence of the anti-bFGF humanized double-stranded antibody is shown in SEQ ID NO.1. The nucleotide sequence of gene encoding the anti-bFGF humanized double-stranded antibody is shown in SEQ ID NO.2. By site-directed mutation, one cysteine residue is introduced into each single-stranded antibody, thus introduce the disulfide bond and form ds-Diabody. It is shown by experiments that the obtained ds-Diabody has the following advantages: enhanced stability; better affinity when binding to the specific antigen bFGF; moderate relative molecular weight, good tumor targeting, approved tumor tissue penetrating power, and higher blood clearance rate, showing a broad application prospects in the clinic diagnosis and medical treatment.

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Patent Citations (2)

    Publication numberPublication dateAssigneeTitle
    CN-101367876-AFebruary 18, 2009南京医科大学日本血吸虫单克隆抗独特型抗体np30单特异性双链抗体及其制备方法、应用
    CN-102532319-AJuly 04, 2012暨南大学二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用

NO-Patent Citations (2)

    Title
    CHEN, YUPING ET AL.: 'Construction and expression of disulphide stabilized bispecific diabody' JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES) vol. 34, no. 1, February 2002, pages 39 - 42
    WANG, HONG ET AL.: 'Cloning of the variable region genes from hybridoma against bFGF and expression of single chain antibody fragments in E. coli HB2151' CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY vol. 23, no. 12, 2007, pages 1150 - 1153

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